Reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa para enumerar bacteriófagos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:25 min. • July 8th, 2025
Para enumerar bacteriófagos mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa, qPCR, obtenga un cóctel de reacción qPCR que contenga ADN polimerasa Taq, cebadores, trifosfatos de desoxinucleótidos (dNTP) y moléculas de colorante reportero fluorescente en un tampón optimizado. Transfiera a los pocillos de una placa de qPCR.
Agregue bacteriófagos tratados térmicamente. El tratamiento térmico libera ADN de bacteriófagos de partículas de bacteriófagos. Selle la placa, evitando la evaporación de la mezcla. Cargue la placa en el sistema qPCR, estableciendo las condiciones de ciclo adecuadas.
El calentamiento a altas temperaturas desnaturaliza el ADN bicatenario en hebras simples. También activa la ADN polimerasa Taq. El recocido hace que los cebadores específicos de secuencia se unan a las cadenas de ADN de bacteriófagos complementarios. La extensión permite que la ADN polimerasa Taq activada agregue dNTP al extremo 3 'del cebador, extendiendo la hebra de ADN en crecimiento en la dirección 5' a 3'.
Las moléculas de tinte se intercalan en el ADN bicatenario recién sintetizado, lo que provoca un aumento de la intensidad de la fluorescencia. Cada ciclo de PCR duplica la cantidad de
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