Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:02 min. • July 8th, 2025
La microesfera-PCR utiliza una esfera de tamaño micro acoplada a oligonucleótidos en su superficie, lo que permite la amplificación preferencial del ADN monocatenario.
Para comenzar la PCR de microesferas, tome una mezcla de reacción que contenga hebras de ADN monocatenario moldeadas, cebadores directos con una etiqueta de nucleótido adicional, ADN polimerasa termoestable, dNTP y microesferas que muestren sondas de oligonucleótidos monocatenarios.
Coloque el tubo en un termociclador y haga funcionar en las condiciones definidas.
En el primer ciclo, a la temperatura de recocido, el ADN molde se une a la sonda en la superficie de la microesfera, de modo que el ADN molde funciona como la hebra sensorial. Durante la extensión, la polimerasa extiende el ADN y el dúplex permanece unido a la microesfera.
En el siguiente ciclo, durante la desnaturalización, el ADN molde se separa de la microesfera, dejando la hebra de la sonda unida a la superficie, sirviendo como molde para una nueva hebra.
Durante el recocido, el cebador etiquetado se une a la hebra antisentido. Más tarde, la polimerasa lo extiende para sintetizar la hebra de sentido con la etiqueta de nucleótido.
Repita el ciclo varias
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