Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:09 min. • July 8th, 2025
La reacción en cadena de la polimerasa de fusión de alta resolución, HRM-PCR, detecta variaciones de secuencia de ADN bicatenario y dsDNA con alta precisión.
Comience con una mezcla maestra que contenga polimerasa Taq inactiva, trifosfatos de desoxirribonucleótidos (dNTP) y el colorante reportero fluorescente. Agregue los cebadores hacia adelante y hacia atrás. Pipetee la mezcla a los pocillos de una placa de PCR.
Agregue la plantilla dsDNA. Selle la placa, evitando la evaporación de la mezcla. Comience la PCR.
La alta temperatura de desnaturalización desnaturaliza el dsDNA a ADN monocatenario, ssDNA, y activa la polimerasa. Luego, la reacción se enfría a la temperatura de recocido, lo que facilita la unión directa e inversa del cebador a los ssDNA a través del emparejamiento de bases complementarias específicas del sitio.
La polimerasa activada se recluta, extendiendo el dúplex de cebador de ADN mediante la adición de dNTP.
El colorante reportero fluorescente, un tinte específico de dsDNA presente en concentraciones saturadas, se intercala dentro de todo el dúplex, fluorescente brillante. El dúplex se somete a múltiples ciclos de PCR, produciendo varios fragmentos que contienen va
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