Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:28 min. • July 8th, 2025
La metilación de residuos de citosina del ADN es un rasgo característico de los leucocitos o glóbulos blancos.
La reacción en cadena de la polimerasa en gotas múltiples, o mdPCR, permite la identificación simultánea de múltiples regiones de ADN metiladas dentro de los leucocitos.
Prepare una mezcla que contenga tampón de reacción, ADN polimerasa y agua libre de nucleasas. Agregue cebadores directos e inversos y sondas de hidrólisis fluorescente específicas para cada región objetivo. Las sondas comprenden reporteros de fluoróforos de diferentes colores unidos a extintores para inhibir la emisión de fluorescencia.
Agregue ADN convertido en bisulfito, en el que las citosinas no metiladas se desaminan en uracilos mientras que las citosinas metiladas permanecen sin cambios. Mezclar.
Llene una jeringa de vidrio con una mezcla de aceite portador y tensioactivo y otra con una mezcla de aceite portador y PCR, y conéctelas al generador de gotas microfluídicas. La mezcla de PCR acuosa de aceite portador se emulsiona en gotas de tamaño subnanolitro. El tensioactivo estabiliza la emulsión y evita la fusión de gotas.
Recoja las gotas y realice la PCR. Dentro de cada gota, la alta temperatura de
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