Dot Blot cuantitativo para estimar las proteínas diana en un lisado de tejidos

El transferencia de puntos cuantitativo, o QDB, es una técnica útil para cuantificar la concentración de proteínas diana en una muestra. Una vez que la muestra se inmoviliza en una membrana polimérica, las proteínas se pueden detectar mediante inmunotransferencia.

Para comenzar, tome una placa QDB, una placa de múltiples pocillos con una membrana de nitrocelulosa unida al fondo de cada pocillo. Agregue la muestra, un lisado de tejido que contiene la proteína objetivo, en el centro de la membrana dentro del pocillo.

Deje que la muestra se seque. La proteína diana se une a la membrana a través de interacciones no covalentes.

Agregue una solución de bloqueo. Las proteínas de la solución se adhieren a los sitios no unidos en la membrana, evitando la unión no específica de los reactivos de detección.

A continuación, agregue una solución que contenga anticuerpos primarios que se unan a la proteína diana en la muestra. Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos.

Luego, agregue una solución de anticuerpos secundarios. Estas moléculas, marcadas con una enzima peroxidasa, se unen a los anticuerpos primarios unidos a proteínas. Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos.

Finalmente, agr