Western Blotting unicelular para determinar la heterogeneidad celular

Los sitios de inflamación contienen varias células inmunitarias, incluidos monocitos, macrófagos y leucocitos.

Para identificar una población celular heterogénea mediante western blot unicelular, tome un chip de transferencia prehidratado, que consiste en un gel de poliacrilamida fotoactivable estampado en bloques. Cada bloque tiene numerosos micropozos. El patrón en varios bloques captura varias celdas en paralelo.

Agregue una suspensión que contenga una población de células heterogéneas. Las dimensiones del pozo permiten que las células individuales se asienten. Sumerja el chip en una cámara de electroforesis llena de un tampón adecuado. Las moléculas de detergente en el tampón alteran la membrana de la célula, liberando contenido celular.

Aplicar un campo eléctrico. Las proteínas liberadas migran a través del gel, separándose en bandas de distintos tamaños. Lave el chip con un tampón de lavado para eliminar las moléculas unidas de forma no específica, dejando solo las proteínas celulares, incluidas las proteínas marcadoras deseadas.

Exponer el gel a la luz ultravioleta, activando su superficie e inmovilizando las proteínas.

Agregue un cóctel de anticuerpos primarios que se unen