Northern Blot para detectar y cuantificar microARN específicos en el extracto de ARN total de tejido vegetal

0 visualizaciones • 8:51 min. • July 8th, 2025

Los microARN, miARN, son ARN pequeños, monocatenarios y no codificantes. Los miARN se incorporan a un complejo multiproteico y se unen aún más a secuencias de ARNm diana complementarias para regular negativamente la expresión génica.

Para detectar miARN específico del ARN total de los tejidos vegetales, agregue un colorante de carga de gel que contenga colorantes de seguimiento y formamida, un agente desnaturalizante del ARN. Caliente la muestra para desnaturalizar el ARN y evitar la formación de estructuras secundarias antes de la electroforesis.

Cargue la muestra y los marcadores de ARN estándar en pocillos de un gel de poliacrilamida desnaturalizante preensamblado. Ejecute electroforesis, facilitando la separación basada en el tamaño de los fragmentos de ARN.

Transfiera el gel a papeles de filtro prehumedecidos en un casete electrosecante. Alinee una membrana secante de nailon empapada en tampón sobre el gel. Luego, apile los papeles de filtro prehumedecidos. Realizar electrotransferencia.

La corriente eléctrica hace que el ARN cargado negativamente, incluido el miARN, salga del gel hacia la superficie de la membrana de nailon cargada positivamente. Exponga la membrana a la luz

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Detección de microARN