Espectroscopía de fluctuación de fluorescencia para estudiar la interacción de proteínas en los contactos celulares

Las interacciones célula-célula, mediadas por proteínas en las superficies celulares vecinas, se pueden estudiar en células vivas utilizando un ensayo de espectroscopia de fluctuación de fluorescencia.

Primero, tome cultivos celulares separados que expresen un receptor de adhesión, una proteína transmembrana. El receptor en las células de las dos poblaciones está marcado con proteínas fluorescentes separadas espectralmente. Estas etiquetas fluorescentes están presentes en la región citoplasmática del receptor, evitando la interferencia con la interacción célula-célula.

Deseche el medio y agregue tripsina, facilitando el desprendimiento celular. Mezcle las dos poblaciones celulares e incube, permitiendo que los receptores de las células vecinas formen interacciones trans homotípicas.

Coloque las células bajo un microscopio confocal. Ilumine la muestra utilizando fuentes láser de longitudes de onda apropiadas, lo que provoca la emisión de ambas etiquetas fluorescentes. Localice dos células vecinas con señales de fluorescencia de diferentes colores en contacto.

Adquiera un escaneo lineal, perpendicular a la región de las membranas celulares en contacto, utilizando el canal espectral d