Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:43 min. • July 8th, 2025
Para comenzar el ensayo de biosensor conductimétrico basado en β lactamasa, tome un chip transductor con electrodos de trabajo, contador y de referencia. El electrodo de trabajo tiene un recubrimiento de polímero conductor, lo que facilita la inmovilización del antígeno objetivo. Los electrodos de referencia y contador carecen de este recubrimiento de polímero.
Agregue una solución que contenga el antígeno objetivo en el chip. Incubar. El antígeno se inmoviliza en la superficie del electrodo de trabajo a través de interacciones no covalentes. Lavar para eliminar los antígenos no unidos.
Agregue una solución de bloqueo. Las proteínas de la solución se adhieren a sitios no unidos en el electrodo de trabajo y los bloquean.
Agregue una proteína quimérica bifuncional al chip para detectar el antígeno inmovilizado. La proteína quimérica comprende una enzima β-lactamasa, una proteína bacteriana responsable de la resistencia a los antibióticos. La enzima se fusiona con un nanocuerpo, la región variable N-terminal de los anticuerpos de dominio único.
Tras la incubación, el nanocuerpo de la proteína se une al antígeno diana inmovilizado. Lavar para eliminar las proteínas quiméricas no unidas.
Conecte el chip a un multímetro digital controlado por computadora. Agregue una solución de detección que contenga el antibiótico bencilpenicilina, un sustrato para la β-lactamasa.
La bencilpenicilina se une a la β-lactamasa de la proteína quimérica unida al antígeno y se hidroliza, lo que provoca la liberación de protones. Los protones inducen un cambio en la conductancia eléctrica del polímero.
Grafique la diferencia de conductancia en tiempo real entre el electrodo de referencia y el electrodo de trabajo con el antígeno diana inmovilizado, confirmando su interacción con la proteína quimérica.
Para comenzar el ensayo de biosensor conductimétrico basado en β lactamasa, tome un chip transductor con electrodos de trabajo, contador y de referencia. El electrodo de trabajo tiene un recubrimiento de polímero conductor, lo que facilita la inmovilización del antígeno objetivo. Los electrodos de referencia y contador carecen de este recubrimiento de polímero.
Agregue una solución que contenga el antígeno objetivo en el chip. Incubar. El antígeno se inmoviliza en la superficie del electrodo de trabajo a través de interacciones no covalentes. Lavar para eliminar los antígenos no unidos.
Agregue una solución de bloqueo. Las proteínas de la solución se adhieren a sitios no unidos en el electrodo de trabajo y los bloquean.
Agregue una proteína quimérica bifuncional al chip para detectar el antígeno inmovilizado. La proteína quimérica comprende una enzima β-lactamasa, una proteína bacteriana responsable de la resistencia a los antibióticos. La enzima se fusiona con un nanocuerpo, la región variable N-terminal de los anticuerpos de dominio único.
Tras la incubación, el nanocuerpo de la proteína se une al antígeno diana inmovilizado. Lavar para eliminar las proteínas quiméricas no unidas.
Conecte el chip a un multímetro digital controlado por computadora. Agregue una solución de detección que contenga el antibiótico bencilpenicilina, un sustrato para la β-lactamasa.
La bencilpenicilina se une a la β-lactamasa de la proteína quimérica unida al antígeno y se hidroliza, lo que provoca la liberación de protones. Los protones inducen un cambio en la conductancia eléctrica del polímero.
Grafique la diferencia de conductancia en tiempo real entre el electrodo de referencia y el electrodo de trabajo con el antígeno diana inmovilizado, confirmando su interacción con la proteína quimérica.