Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 5:20 min. • July 8th, 2025
Para el ensayo de dos híbridos de levadura, tome una suspensión de células de levadura de crecimiento activo y genéticamente modificada que carece de la proteína activadora de la transcripción, GAL4. Estas células no pueden sintetizar leucina y triptófano.
Agregue un par de plásmidos de expresión: uno que codifica leucina y el dominio de unión al ADN, DNA-BD, de GAL4, fusionado con un dominio de proteína diana, y el otro que codifica triptófano y el dominio activador, AD, de GAL4 fusionado con otro dominio de la proteína diana.
Agregue un búfer que contenga agentes adecuados para la transformación. Choque térmico las células para causar la formación transitoria de poros, lo que facilita la absorción celular de plásmidos. Deje enfriar para volver a sellar los poros. Coloque las células en un medio de crecimiento selectivo que carezca de leucina y triptófano.
Las células transformadas que expresan dos proteínas híbridas sintetizan leucina y triptófano, sobreviven y forman colonias.
El ADN-BD fusionado con un dominio de proteína se une a la secuencia de ADN ascendente específica de la región promotora del gen que codifica la β-galactosidasa. Si los dominios de la proteína diana intera
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