Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 6:05 min. • July 8th, 2025
La espectroscopia de resonancia magnética nuclear, o RMN, permite la detección de la interacción proteína-proteína a nivel atómico.
Para estudiar las interacciones entre proteínas globulares y helicoidales, marque proteínas globulares purificadas de tipo salvaje o mutantes con 15N, un isótopo de nitrógeno. En un tubo de RMN, mezcle las proteínas globulares y helicoidales marcadas sin marcar en un disolvente que contenga un patrón de RMN. Inserte el tubo en el espectrómetro de RMN.
Los imanes del espectrómetro generan un fuerte campo magnético, alineando los 15núcleos de proteínas globulares marcados con N paralelos al campo. Un pulso de radiofrecuencia, o RF, excita los 15núcleos N para alinearlos antiparalelos al campo.
La frecuencia de pulso requerida para la transición de 15núcleos N entre los dos estados define la frecuencia de resonancia. La normalización de la frecuencia de resonancia de 15N al estándar de RMN mide el cambio químico de 15N.
El campo magnético se ajusta para alinear los núcleos 1H, unidos a 15N, paralelos al campo. Se ajustan los pulsos de RF y se registra el desplazamiento químico de 1H.
Durante las interacciones de proteínas, el entorno químico que rodea a l
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