Uso de la visualización de fagos para seleccionar proteínas con alta afinidad con una proteína objetivo

Comience la visualización de fagos agregando una biblioteca de fagos a los pocillos de una placa de pocillos múltiples, recubierta con proteína diana. La biblioteca de fagos contiene fagos modificados genéticamente, cada uno de los cuales muestra una variante de proteína individual fusionada con una proteína de recubrimiento en su superficie. Incubar, permitiendo que el fago y las proteínas diana interactúen.

Los fagos con proteínas con una alta afinidad de proteína diana se unen a la proteína diana. Lavar con un tampón, eliminando los fagos no unidos. Agregue una solución ácida, interrumpiendo las interacciones entre los fagos y las proteínas objetivo, liberando fagos en la solución. Neutralice el pH de la solución con un tampón, manteniendo la estabilidad del fago.

Transfiera los fagos a un tubo nuevo. Incubar con una solución bloqueadora que contenga proteínas, evitando interacciones inespecíficas.

Transfiera los fagos a una suspensión de E. coli que se divide activamente, infectando bacterias e iniciando el ciclo de replicación de fagos. Complemente con fagos auxiliares, que infectan las bacterias, proporcionando las proteínas de la cubierta necesarias para empaquetar los fagos