Ensayo de desplazamiento de movilidad electroforética para la detección de complejos de factor de transcripción-ADN
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:31 min. • July 8th, 2025
Las proteínas reguladoras, como los factores de transcripción, reconocen y se unen a secuencias específicas de ADN en las regiones promotoras, regulando la expresión génica.
Para detectar interacciones específicas entre el factor de transcripción y el ADN mediante el ensayo de desplazamiento de movilidad electroforética, comience con un tubo que contenga un factor de transcripción deseado y sondas específicas de ADN marcadas con colorante fluorescente, infrarrojo e infrarrojo en un tampón de unión. Incubar en la oscuridad, evitando el fotoblanqueo del tinte.
La fuerza iónica y el pH del tampón proporcionan las condiciones adecuadas para que el factor de transcripción identifique y se una a secuencias de unión específicas en la sonda de ADN. Los iones de magnesio en el tampón estabilizan aún más los complejos proteína-ADN.
Agregue un tinte de carga adecuado a la mezcla, lo que ayuda a visualizar la progresión de la electroforesis. Cargue esta mezcla y las sondas de ADN en los pocillos de un gel de poliacrilamida prefabricado y no desnaturalizante.
Realice electroforesis en la oscuridad.
El campo eléctrico aplicado hace que las sondas de ADN de bajo peso molecular, no unidas y cargad
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos