Inmunoprecipitación de cromatina para identificar sitios de unión a proteínas diana en el ADN genómico

Para identificar los sitios de unión de una proteína diana en el ADN, comience con células precursoras de oligodendrocitos que contengan una proteína diana reticulada a secuencias específicas de ADN en la cromatina.

Tratar las células con un tampón de lisis que contenga inhibidores de la proteasa. El tampón de lisis lisa las células, mientras que los inhibidores inactivan las proteasas para conservar la integridad de los complejos proteína-cromatina.

Sonicar el contenido para cortar los complejos en fragmentos de cromatina más pequeños, y algunos retienen la proteína objetivo.

Centrifugar para granular los componentes celulares y transferir el sobrenadante que contiene fragmentos de cromatina a un tubo nuevo. Incubar con anticuerpos anti-objetivo que se unen específicamente a la proteína diana en los fragmentos de cromatina.

Complemente el tubo con perlas magnéticas recubiertas de proteína A que se unen a la región Fc de los anticuerpos preunidos. Aplique un campo magnético para precipitar selectivamente las proteínas diana unidas a anticuerpos complejadas con fragmentos de cromatina.

Trate los complejos de perlas con un tampón de elución con alto contenido de sal para interrumpir