Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 2:43 min. • July 8th, 2025
Las interacciones proteína-fosfolípido en la membrana celular son cruciales para la regulación de varios procesos celulares.
Para detectar interacciones proteína-fosfolípidos diana in vitro mediante citometría de flujo cuantitativa, tome un tubo que contenga una concentración deseada de imitador de la membrana celular (vesículas de fosfolípidos marcadas con colorante lipofílico de tamaño micrométrico) en tampón.
Agregue una concentración adecuada de diferentes proteínas diana marcadas con fluorescencia en solución.
Inyecte la suspensión en el citómetro de flujo. Establezca los parámetros del sistema de fluidos en un caudal bajo para permitir tiempo suficiente para las interacciones proteína-fosfolípido.
A medida que las proteínas marcadas con fluorescencia y las vesículas de fosfolípidos interactúan en el canal de flujo, aumenta la concentración de proteínas unidas a las vesículas.
A medida que estos complejos pasan a través de los rayos láser desde canales de fluorescencia específicos que proporcionan longitudes de onda adecuadas, se excitan. Estas proteínas excitadas y vesículas de fosfolípidos en el complejo emiten señales de fluorescencia respectivas al relajarse al estado fund
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