Imágenes de una sola molécula para visualizar el ensamblaje de condensados de proteínas de fusión en cortinas de ADN

Una proteína de fusión oncogénica quimérica contiene el dominio N-terminal de baja complejidad, LCD, de una proteína de unión al ARN fusionada con el dominio de unión al ADN, DBD, de una proteína del factor de transcripción. Estas proteínas forman un condensado de proteínas, que recluta ARN polimerasa-II e impulsa la oncogénesis.

Para visualizar el ensamblaje de condensados de proteínas mediante imágenes de una sola molécula, comience con una celda de flujo de ADN, un portaobjetos de vidrio de sílice fundida equipado con puertos de inyección de entrada y salida. La superficie de la celda de flujo está recubierta con una bicapa lipídica biotinilada para proteger la superficie y fabricada con una barrera en zigzag.

Conéctalo a un sistema microfluídico. Introduzca una solución de estreptavidina, que se une a su ligando de afinidad de alta unión, la biotina, en la capa lipídica. Inyecte ADN lambda bicatenario marcado con biotina, que contiene múltiples repeticiones de secuencias de unión a proteínas de fusión. La estreptavidina de la bicapa lipídica se une a la biotina del ADN y une el ADN lambda a la bicapa.

Enjuague con un tampón adecuado. La fuerza hidrodinámica de su flujo endereza