Ensayo de modulación del pH en bicapas lipídicas soportadas para detectar interacciones proteína-fosfoinositida

El fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato, o PIP2, es un fosfolípido fosforilado menor unido a la membrana. La fosfolipasa C, o PLC, con dominios específicos de unión a PIP2, se une a PIP2, generando mensajeros secundarios esenciales para varios procesos celulares.

Para detectar interacciones PLC-PIP2 in vitro, comience con una pequeña vesícula unilamelar, SUV, suspensión ácida, que comprende PIP2 y una mezcla de fosfolípidos, una de las cuales se conjuga con un colorante fluorescente sensible al pH.

Pipetee la solución en la tubería de entrada y salida de un dispositivo microfluídico fabricado preensamblado. Transfiera y asegure el dispositivo a una platina de microscopio de fluorescencia. A través de la gravedad, los SUV pasan a través del piso de microcanales, hecho de un cubreobjetos de vidrio hidrófilo.

Los SUV se adsorben en la superficie del vidrio, el pH de la solución reduce la repulsión electrostática entre los dos. Los SUV interactúan con la superficie, deformándose y fusionándose para formar grandes vesículas.

Después de una cobertura superficial crítica, las vesículas se rompen espontáneamente, formando una bicapa lipídica soportada, SLB. Pase un amortiguador a través del c