Espectroscopía cuantitativa de RMN de hidrógeno en célula para monitorizar las interacciones proteína-ligando

Para monitorear las interacciones de las proteínas diana con ligandos de prueba de moléculas pequeñas en un entorno celular nativo, comience con un tubo de RMN lleno de un tampón que contiene un tapón de gel en la base. Inyecte las células que expresan proteínas diana, incrustadas en agarosa en el tubo de RMN, formando estructuras en forma de hilo.

Cargue el tubo en la unidad de flujo de un biorreactor, suministrando un medio de crecimiento para mantener la viabilidad celular. Inserte la unidad de flujo dentro de un instrumento de resonancia magnética nuclear o RMN.

Bajo un fuerte campo magnético, los núcleos atómicos de los átomos de hidrógeno de las proteínas se magnetizan y se alinean paralelos al campo, adaptándose a un estado de baja energía.

Aplique un pulso de radiofrecuencia, lo que hace que los núcleos se alineen antiparalelos al campo magnético, lo que les permite pasar a estados de mayor energía.

Después de un breve pulso, los núcleos vuelven a su posición original, emitiendo energía absorbida. El detector captura esta energía, generando un espectro de RMN que representa las frecuencias de resonancia del átomo de hidrógeno. Cada pico espectral corresponde a un átomo de h