Calorimetría diferencial de barrido para estudiar la interacción entre el aptámero y el ligando termolábil del ADN
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 7:16 min. • July 8th, 2025
La calorimetría diferencial de barrido ayuda a estudiar las interacciones biomolécula-ligando midiendo el calor necesario para desnaturalizar la biomolécula en ausencia y presencia del ligando.
Para comenzar, tome una referencia que contenga aptámeros de ADN libres, oligonucleótidos monocatenarios estructurados, y una muestra que contenga aptámeros unidos a ligandos termolábiles. Los ligandos estabilizan la estructura secundaria del aptámero.
Realice un escaneo hacia adelante calentando las soluciones. Al alcanzar la temperatura de fusión, los aptámeros libres se desnaturalizan.
Los aptámeros estabilizados con ligandos se disocian de los ligandos y se desnaturalizan a una temperatura relativamente más alta, lo que provoca un aumento en la temperatura de fusión en comparación con los aptámeros libres. A altas temperaturas, un subconjunto de ligandos obtiene una forma secundaria irreversible con una baja afinidad de unión.
A continuación, realice un escaneo inverso enfriando las soluciones para recuperar la estructura del aptámero. A la temperatura más baja, los ligandos iniciales y convertidos de la muestra se unen a los aptámeros.
Durante el segundo escaneo directo, los aptámeros u
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