Ensayo de unión competitiva para identificar compuestos que interrumpen las interacciones receptor-ligando

El ensayo de unión competitiva identifica moléculas pequeñas que interrumpen las interacciones receptor-ligando al unirse competitivamente a un receptor diana, inhibiendo la unión natural del ligando.

Para identificar las interacciones de un receptor con su ligando natural en presencia de un antagonista de molécula pequeña específico del receptor, comience con una suspensión de células de linfocitos T humanos que expresan el receptor objetivo.

Agregue la suspensión celular a los pocillos de una placa de pocillos múltiples que contenga concentraciones crecientes de antagonistas. Incubar. El antagonista se une al sitio de unión ortostérico, el sitio natural de unión al ligando del receptor.

Agregue una concentración fija de ligandos naturales marcados con fluorescencia a los pocillos. Incubar.

A bajas concentraciones, los antagonistas ocupan pocos sitios de unión ortostéricos, lo que permite la unión natural del ligando a los receptores. Sin embargo, a concentraciones más altas, los antagonistas ocupan la mayoría de los sitios de unión ortostéricos, lo que permite una unión natural mínima ligando-receptor.

Centrifugar para peletizar las células. Deseche el sobrenadante. Resuspender l