Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 8:15 min. • July 8th, 2025
El glucógeno, un polímero de glucosa ramificado, es una reserva de energía en los compartimentos intermiofibrilares, intramiofibrilares y subsarcolémicas subcelulares dentro del músculo esquelético humano.
Para cuantificar la distribución de glucógeno subcelular mediante microscopía electrónica de transmisión, TEM, obtener tejido muscular esquelético humano aislado. Fijar con glutaraldehído para preservar la estructura del tejido. Coloque el tejido en una solución de tetróxido de osmio y ferrocianuro de potasio.
El complejo reducido de osmio-ferrocianuro se une a los grupos hidroxilo en el glucógeno, mejorando el contraste de las partículas de glucógeno en el músculo. Además, las membranas y el retículo sarcoplásmico, un orgánulo unido a la membrana, se tiñen.
Deshidratar el tejido en concentraciones crecientes de etanol. Incrustar en resina, formando un bloque sólido. Obtenga secciones ultrafinas con fibras musculares orientadas longitudinalmente; transferir a rejillas TEM.
Sumerja las rejillas en acetato de uranilo, solución de metales pesados. Los iones de uranilo se unen a lípidos y proteínas cargados negativamente, lo que los hace densos en electrones. Manchar con solución de
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