Aislamiento magnético de microglía a partir de cerebros de cachorros de ratón
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:45 min. • July 8th, 2025
La microglía, los macrófagos residentes en el cerebro, expresan CD11b, una integrina de la superficie celular.
Para aislar la microglía de los cerebros de las crías de ratón, tome fragmentos de cerebro en tubos de disociación que contienen tampón con papaína, una enzima proteolítica, y desoxirribonucleasa.
Coloque los tubos en un disociador mecánico. Durante la carrera, el disociador altera mecánicamente el tejido.
La papaína digiere la matriz extracelular del tejido, liberando células, incluida la microglía, en suspensión. La desoxirribonucleasa degrada el ADN libre en suspensión, evitando el aislamiento celular ineficiente.
centrífuga. Complete la disociación mecánica pipeteando. Transfiera la suspensión a través de un filtro celular para eliminar los desechos y los grupos celulares, y obtenga una población unicelular homogénea.
Incubar con microperlas superparamagnéticas funcionalizadas con anticuerpos anti-CD11b. Las microperlas se unen específicamente a CD11b en las células, incluida la microglía.
Post-incubación, centrífuga. Retire el sobrenadante que contiene las cuentas sin unir. Vuelva a suspender las celdas en el búfer. Cargue en una columna colocada en un separador magné
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