Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:00 min. • July 8th, 2025
Tomemos un ratón anestesiado diseñado para expresar una proteína fluorescente en neutrófilos. Afeita el dorso y crea un corte circular. Extirpe la piel cortada para revelar la fascia, una capa de tejido conectivo debajo.
Tome una jeringa que contenga una suspensión de Staphylococcus aureus, una bacteria patógena, modificada genéticamente para producir bioluminiscencia. Inyectar la suspensión entre la fascia y el tejido subyacente generando una infección localizada de la herida.
Los receptores de reconocimiento de patrones en las células estromales de la fascia reconocen los patrones moleculares asociados a patógenos en las bacterias. Esta unión induce la liberación de citoquinas proinflamatorias y quimioatrayentes, lo que resulta en inflamación.
Los quimioatrayentes reclutan neutrófilos circulatorios en el sitio de la infección. Los neutrófilos entrantes engullen a las bacterias en un fagosoma que se fusiona con los gránulos citoplasmáticos, lo que provoca la liberación de péptidos antimicrobianos.
La NADPH oxidasa, un complejo enzimático, se ensambla en la membrana del fagosoma y produce especies reactivas de oxígeno o ROS. Los péptidos antimicrobianos y las ROS provocan la degradación bacteriana.
Como contrarrespuesta, las bacterias secretan factores de virulencia que permeabilizan la membrana de neutrófilos, provocando la lisis celular. Las bacterias también liberan enzimas para la deposición de fibrina para evitar la fagocitosis.
La respuesta inmunitaria conduce a un absceso, una cápsula de fibrina que contiene células bacterianas, neutrófilos y células muertas.
Registre la fluorescencia de neutrófilos y la bioluminiscencia bacteriana para visualizar la interacción bacteria-neutrófilo.
Para la inoculación de Staph aureus, llene una jeringa de insulina de calibre 28 con 50 microlitros del inoculante bacteriano bioluminiscente preparado y use un dedo para tirar de la dermis del animal herido hacia un lado. Sosteniendo la jeringa casi paralela al tejido, inserte lentamente la jeringa en el tejido hasta que se sienta una disminución repentina de la resistencia, lo que indica una perforación de la fascia.
Con la aguja colocada en el centro de la herida, administre lentamente todo el volumen del inoculante. Confirme que el inoculante forma una burbuja en el centro de la herida con una fuga o dispersión mínima, y retire la jeringa lentamente del animal. Luego, regrese al animal a su jaula con calor y monitoreo hasta que se recupere por completo.