Un modelo murino de uveítis micobacteriana preparada para estudiar la uveítis posinfecciosa

La inflamación ocular crónica, o uveítis, después de una infección bacteriana sistémica, se denomina uveítis posinfecciosa.

Para generar un modelo de uveítis postinfecciosa, tome un ratón anestesiado previamente inmunizado con Mycobacterium tuberculosis o Mtb muerto por calor. El cebado, la exposición previa al inmunógeno, genera células T circulantes específicas de Mtb.

Inyecte el mismo inmunógeno en la cavidad vítrea del ojo. Las micobacterias se difunden a través del humor vítreo y se extienden por el ojo. Las barreras oculares y sanguíneas restringen la entrada de células inmunitarias en el ojo, lo que lo convierte en un órgano inmunoprivilegiado.

Las células presentadoras de antígenos residentes en tejidos o APC, en la región perivascular, encuentran el inmunógeno difuso. Al internalizar el inmunógeno, las APC procesan el antígeno Mtb y lo muestran en la superficie a través del complejo principal de histocompatibilidad o MHC.

Las APC activadas también liberan citocinas proinflamatorias que causan permeabilidad de la barrera de unión estrecha endotelial en el vaso sanguíneo. Los leucocitos, incluidos los neutrófilos y las células T específicas de Mtb, se extravasan al espacio perivascular.

Las células T específicas de Mtb se unen a su antígeno en las APC y liberan citocinas proinflamatorias, que inducen a los neutrófilos a producir especies reactivas de oxígeno, o ROS, y causan degranulación.

Las proteasas granulares liberadas y las ROS causan la degradación del parénquima tisular y la ruptura de la barrera ocular-sanguínea, lo que exacerba la inflamación.

El modelo de infección está listo para el análisis posterior.

El día de la inyección, después de confirmar la profundidad de la anestesia general, anestesiar la córnea con una gota de tetracaína al 0,5% y dilatar la pupila con una gota de fenilefrina al 2,5%. Después de eliminar el exceso de líquido, agregue una gota de betadine al 5% a la superficie de los ojos y al cabello circundante para disminuir el riesgo de endoftalmitis.

Después de dos o tres minutos, retire el betadine y cubra el ojo con gel de hipromelosa al 0,3% para evitar la sequedad bajo anestesia y la formación de cataratas. A continuación, cargue una jeringa de 10 microlitros con la mezcla de antígeno y fluoresceína. Luego, coloque el mouse en posición prona en la plataforma y use las barras de los oídos derecho e izquierdo para fijar la cabeza del mouse.

Coloque y oriente el ratón debajo del endoscopio de modo que se vea la cara nasal superior del ojo derecho. Luego, con una aguja de calibre 30, desplaza las pestañas, expone la esclerótica y visualiza el limbo y el vaso sanguíneo radial.

A continuación, con una aguja estéril de calibre 30, haga un orificio guía en la esclerótica de 1 a 2 milímetros posterior al limbo. Luego, inserte la aguja de calibre 34 unida al portainyecciones en el ojo a través del orificio guía en un ángulo que evite la lente, pero coloque la punta de la aguja en la cavidad vítrea.

Con un controlador de bomba de microjeringa, inyecte cuidadosamente 1 microlitro del extracto de tuberculosis M en la cavidad vítrea. En caso de reflujo constante, aumente el volumen de inyección a 1,5 microlitros para garantizar una administración de dosis adecuada. Confirme la colocación intravítrea visualizando un reflejo verdoso en el ojo y, después de diez segundos, retire la aguja del ojo.