Name: Canulación de la glándula salival submaxilar del ratón a través del conducto de Wharton (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Aprende a canular la glándula salival submaxilar del ratón mediante el conducto de Wharton usando solución de azul de tripano para visualizar la infusión. Esta técnica permite entregar células progenitoras para estudios de regeneración glandular.

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Los autores agradecen a la Dra. Ana Cotrim de consulta técnica y al Dr. Monzur Murshed para el equipo. Este trabajo fue parcialmente financiado por los Institutos Canadienses de Investigación en Salud.

1. Descripción del procedimiento <ol><li> Por vía subcutánea inyectar 1 l / g de peso corporal de 0,5 mg / ml monohidrato de sulfato de atropina (Cat # 11330, Fluka, EE.UU.) en cada ratón para evitar que las secreciones salivales de interrumpir el movimiento de las infusiones. </li><li> Anestesiar a cada ratón con un peso corporal l / g de 100 mg / ml de ketamina y 20 mg / ml de solución de xilacina (Phoenix Científico, AR, EE.UU.) inyectó intraperitoneal (IP) </li><li> Coloque el ratón sobre una plataforma de plástico a medida en la posición ventral: los incisivos superiores están encerrados en un alambre de metal, y los incisivos inferiores están enganchados a una cuerda elástica con el fin de mantener la boca abierta. </li><li> Use una jeringa de insulina con una aguja de calibre 29 (Cat # 600145, Tyco Healthcare, MA, EE.UU.), colocado dentro de un tubo de polietileno de 0,58 mm de diámetro (Cat # 427410, Becton Dickinson, MD, EE.UU.; Fig. 2). El tubo de polietileno de 5 mm se inserta en la punta de una aguja de calibre 29. La aguja se utiliza como una guía rígida para mover el tubo de polietileno en el conducto de Wharton. El tubo de polietileno se introduce 5.3 mm en el interior del conducto. Tenga en cuenta que sólo el tubo de polietileno entra en el conducto de la glándula salivar, mientras que la aguja se queda fuera del conducto. Inyectan 50 ul de agua filtrada 0,4% solución de azul tripano mancha (Cat # 15250, Gibco, EE.UU.) en la glándula submandibular a través del conducto de Wharton, que se encuentra justo debajo de la lengua. La infusión se entrega de manera constante con presión positiva sobre el émbolo de la jeringa, el dedo se mantiene en el pistón, incluso después de todo, de la infusión se ha entregado a la glándula, con el fin de evitar el retroceso de la infusión intra-oral. La solución de azul tripán se usa en el video como un medio de contraste para demostrar la técnica. </li><li> espués de la inyección de la solución de azul de tripano, el ratón fue sacrificado antes de la disección. La glándula salival es expuesta quirúrgicamente con el fin de determinar la cantidad de las infusiones se han mantenido en la glándula. </li></ol> 2. Los resultados representativos: Después de las infusiones fueron inyectados, el ratón fue disecada para exponer quirúrgicamente de la glándula salival después de la cánula. Como se muestra en la imagen-2, la coloración oscura del conducto de Wharton ofrece evidencia de que la solución de azul tripán se infundió con éxito. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig1.jpg" alt="Figura 1"> Figura 1. Canulación de la glándula submandibular del ratón. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig2.jpg" alt="Figura 2"> Figura 2. Polietileno tubo está envuelto alrededor de la punta de una aguja de calibre 29. La aguja de la jeringa se usa como una guía rígida para mover el tubo de polietileno en el conducto de Wharton. El tubo de polietileno se inserta (cánula) 3-5 mm en el interior del conducto. Tenga en cuenta que sólo el tubo de polietileno entra en el conducto de la glándula salivar, mientras que la aguja se queda fuera del conducto.

<ol><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+salivary+dysfunction.+Drugs+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation.</a> Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).</li>
<li>Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).</li>
</ol>

Todos los experimentos han sido aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la Universidad y estaban en conformidad con las directrices del Consejo Canadiense de los Animales.

Una dificultad con este método es la canalización para evitar el reflujo de la solución inyectada. Aunque la solución de azul tripan ha migrado temporalmente en la glándula salival con éxito, la secreción de la saliva puede interferir con las infusiones y causar reflujo de la solución de azul tripano de la glándula. Como medida de precaución, además de utilizar la atropina para inhibir la secreción de saliva, la cánula de polietileno deben permanecer en el conducto de Wharton y el émbolo de la jeringa cabo durante 60 se...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Tipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> Atropina </td><td> Droga </td><td> Fluka </td><td> 11330 </td><td> Para inhibir la secreción de saliva </td></tr><tr><td> La ketamina </td><td> Droga </td><td> Phoenix Científico </td><td></td><td> Sedación </td></tr><tr><td> Xilazina </td><td> Droga </td><td> Phoenix Científico </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tubos de polietileno (0,58 mm de diámetro) </td><td> Tubo </td><td> Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems </td><td> 427410 </td><td> Para insertar más de punta de aguja para evitar la lesión del tejido durante la inserción en el conducto de Wharton. </td></tr><tr><td> Muy cómoda jeringa de insulina (con una aguja 29G) </td><td> Jeringa </td><td> Tyco Healthcare </td><td> 600145 </td><td></td></tr><tr><td> 4% de azul de tripano </td><td> Mancha </td><td> Gibco </td><td> 15250 </td><td></td></tr></tbody></table>

canulación de la glándula salival submaxilar del ratón a través del conducto de wharton

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Hipofunción de las glándulas salivales grave se encuentra con frecuencia en pacientes con síndrome de Sjögren y los que reciben la irradiación terapéutica en la cabeza y región del cuello para el tratamiento del cáncer. Ambos grupos de pacientes experimentan síntomas tales como la xerostomía (boca seca), disfagia (deterioro de la masticación y deglución), caries dentales graves, alteración del gusto, orofaríngea infecciones (candidiasis), mucositis, dolor y malestar. Un enfoque innovador de la medicina regenerativa para el tratamiento de la glándula salival hipofunción se especula en RS Redman, Mezey E et al 2009:. Células madre pueden ser depositados directamente por la canalización en la glándula como un método potente para la reactivación de las funciones de las personas con discapacidad órgano. Es de suponer que las células madre migran extranjeros se diferencian en células glandulares que funcionan como parte de la glándula salival de acogida. Además, esta técnica de la canalización es un método de entrega rápido y efectivo para la aplicación clínica de transferencia de genes. Aquí se ilustran los pasos necesarios para realizar el procedimiento de canalización en el ratón de la glándula salival submaxilar a través del conducto de Wharton (Fig. 1). C3H ratones (Charles River, Montreal, Quebec, Canadá) se utilizan para este experimento, que se han mantenido bajo condiciones de limpieza convencionales en el centro de la Universidad McGill de recursos animales. Todos los experimentos han sido aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la Universidad y estaban en conformidad con las directrices del Consejo Canadiense de los Animales. Para este experimento, una solución de azul tripán se infunde en la glándula a través de la abertura del conducto de Wharton con una jeringa de insulina con una aguja de calibre 29 encerrados dentro de un tubo de polietileno. Posteriormente, el ratón se diseca para demostrar que las infusiones migrado con éxito dentro de la glándula.

Un protocolo para la canalización de la glándula salival submaxilar del ratón a través de conductos de Wharton se describe. Para este experimento, la solución de azul tripán se usa como un tintorero para demostrar cómo esta técnica efectiva entrega infusiones en la glándula blanco, y sugerir la fiabilidad de este nuevo enfoque como un potencial clínico de drogas / terapia celular para la regeneración de las glándulas salivales.

Canulación de la glándula salival submaxilar del ratón a través del conducto de Wharton

La hipofunción grave de las glándulas salivales se encuentra frecuentemente en pacientes con síndrome de Sjögren y en aquellos que reciben irradiación terapéutica en su ...

Todos los experimentos han sido aprobados por el Comité de Cuidado de Animales de la Universidad McGill, y cumplimos con las directrices del Consejo Canadiense de Cuidado de Animales. El objetivo de este experimento es administrar células progenitoras o células madre en la glándula salival mandibular del ratón mediante la canulación del conducto de Wharton. Para este video, se utiliza una solución de azul de tripan como colorante para visualizar la infusión celular.La hipofunción de las glándulas salivales es uno de los efectos secundarios más comunes del síndrome de Sjögren y de la radioterapia administrada en el tratamiento del cáncer en las regiones de la cabeza y el cuello. La disfunción de la glándula salival a menudo puede provocar enfermedades dentales, como infecciones de la mucosa oral y caries dental. Uno de los enfoques innovadores de la medicina regenerativa para el tratamiento de las glándulas salivales dañadas es el siguiente.Las células madre pueden depositarse directamente en la glándula mediante una cánula a través de los conductos de la glándula salival, un método potente para restaurar las funciones de la glándula dañada; se presume que las células madre foráneas migradas se diferenciarán en células glandulares y funcionarán como parte de la glándula salival. A continuación, se describen los pasos necesarios para realizar el procedimiento de cánulación en la glándula salival submandibular del ratón a través del conducto de Wharton. Para este experimento, se inyecta la solución trip y azul en la glándula a través de la abertura del conducto de Wharton utilizando una aguja y jeringa ultra cómodas de 29 g.Posteriormente, se realiza una disección del ratón para demostrar que las infusiones migraron con éxito hacia la glándula por completo. Paso uno: se inyecta un microlitro por gramo de peso corporal de sulfato de atropina monohidratado al 0,5 miligramos por mililitro en cada ratón por vía subcutánea para evitar que las secreciones salivales interrumpan el movimiento de las infusiones. Paso dos: se inyecta un microlitro por gramo de peso corporal de una solución de 100 miligramos por mililitro de ketamina y 20 miligramos por mililitro de xilacina en cada ratón por vía intraperitoneal para sedar al animal.Paso tres. Después del proceso de sedación, se coloca al ratón sobre una plataforma. En posición ventral, el incisivo maxilar se fija a un alambre metálico y el incisivo mandibular se engancha a una cuerda elástica para mantener la boca abierta.Paso cuatro, utilizando una aguja y jeringa ultra cómoda de 29 G, se infunde una solución azul de trian al 0,4 % filtrada en la glándula salival submandibular a través del conducto de Wharton, que se encuentra justo debajo de la lengua. La aguja ahora apunta hacia la abertura del conducto de Wharton y ya ha entrado en el conducto para administrar la infusión. Paso cinco.Inmediatamente después del procedimiento de cannulación, se expone quirúrgicamente la glándula salival para determinar cuánto de la infusión ha permanecido realmente en la glándula. Después de inyectar las infusiones, se diseccionó al ratón para exponer quirúrgicamente la glándula salival post-cannulada. Como puede observarse en esta imagen, la coloración oscura del conducto de Wharton ofrece una fuerte evidencia de que la solución azul trippin se infundió con éxito en el caso de la hipofunción de la glándula salival.La aplicación local, es decir, la inyección de fármacos y células mediante este procedimiento de canulación, puede considerarse una forma más directa y eficaz de restaurar las funciones de las glándulas salivales parótida, submandibular y sublingual. Como se observa en los resultados representativos, las infusiones, en este caso la solución azul de Trian, se depositaron con éxito en la glándula salival submandibular del ratón a través del conducto de Wharton. Por lo tanto, esta técnica de canulación puede utilizarse como un modelo confiable para la medicina regenerativa de la glándula salival del ratón.Y como perspectiva futura, este procedimiento podría ser un método expedito para la aplicación clínica de transferencia génica. Sería muy satisfactorio que este artículo visual se utilice como una herramienta eficaz para estudiantes e investigadores interesados en estudios futuros sobre la medicina regenerativa de la glándula salival.

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