Uso de la hibridación in situ de fluorescencia de inmunoARN para visualizar el SARS-CoV-2
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:59 min. • July 8th, 2025
Tomemos como ejemplo las células Vero infectadas con coronavirus fijas y permeabilizadas, una línea celular de mamíferos deficiente en interferón.
Dentro del huésped, el ARN viral está presente como subgenómico o sgRNA, moléculas de ARN de longitud intermedia que codifican proteínas virales específicas sintetizadas mediante transcripción.
Agregue sondas de reacción en cadena de hibridación o iniciador de HCR.
La sonda HCR se une a su secuencia complementaria en el ARN diana.
Introducir sondas de horquilla de oligonucleótidos marcadas con fluorescencia, H-1 y H-2.
La sonda iniciadora se une a su cola H1 complementaria, linealizando la estructura de horquilla.
La secuencia H1 expuesta se une a su cola H2 complementaria.
La secuencia H2 final continúa uniéndose a una cola H1, amplificando las sondas marcadas con fluorescencia alrededor del área objetivo y generando una señal robusta.
Agregue los anticuerpos apropiados para visualizar el citoesqueleto de la célula huésped.
Tiñe los núcleos con DAPI.
Bajo un microscopio de fluorescencia, las células infectadas por virus muestran fluorescencia roja en el citoplasma, lo que indica la presencia del ARN diana.
Después de fijar y permeabiliz
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