Evaluación de la eficacia de un compuesto de prueba antiviral a través de un ensayo de inactivación viral
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:41 min. • July 8th, 2025
Tome tubos con un virus de la hepatitis C recombinante o una suspensión del VHC que contenga ARN que codifique un indicador de luciferasa secretado.
Agregue un compuesto de prueba antiviral y solvente a los tubos de prueba y control negativo.
Los compuestos de prueba se unen a las glicoproteínas del VHC, inactivando el virus.
Después de la incubación, diluya las mezclas para evitar interacciones compuesto-célula en pasos posteriores.
Agregue estas mezclas diluidas a las monocapas de hepatoma que apoyan la replicación del VHC. Incubar.
El VHC inactivado por compuestos no puede unirse a receptores específicos de la superficie celular, mientras que las glicoproteínas activas del VHC se unen a estos receptores, facilitando la unión celular.
Elimine los VHC no adsorbidos. Lave con tampón y agregue medios. Incubar durante un período prolongado.
El VHC unido se internaliza, libera ARN viral y conduce a la síntesis de proteínas virales y luciferasas, secretadas por la célula.
Recolecte los sobrenadantes de cultivo que contienen luciferasa. Centrifugar y agregar un sustrato de luciferasa a los sobrenadantes.
La luciferasa oxida el sustrato, emitiendo luz.
Una luminiscencia más alta en el po
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