Visualización basada en microscopía TIRF de la formación y el cierre de fagosomas
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:13 min. • July 8th, 2025
Tome un plato con fondo de vidrio recubierto de polímero que contenga glóbulos rojos opsonizados con IgG o glóbulos rojos adheridos a su superficie.
Coloque el plato en una platina de microscopio de fluorescencia de reflexión interna total, manteniéndolo a temperatura fisiológica.
Agregue macrófagos que contengan péptidos citoplasmáticos marcados con fluorescencia que se unan a la actina polimerizada, lo que facilita la visualización del citoesqueleto.
Durante la obtención de imágenes, dirija un rayo láser en un ángulo superior al ángulo crítico, lo que provoca una reflexión interna y la generación de ondas evanescentes en el punto de contacto.
Las ondas evanescentes iluminan selectivamente los fluoróforos en la interfaz vidrio-muestra, lo que permite la visualización en tiempo real de la fagocitosis.
Los receptores Fc de los macrófagos se unen a los glóbulos rojos opsonizados con IgG, lo que provoca la agrupación de receptores alrededor del área de contacto.
La agrupación desencadena vías de señalización intracelular y la activación de GTPasa, impulsando la polimerización de actina y el reclutamiento de dinamina, formando pseudópodos.
Los seudópodos se extienden alrededor de los g
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