Un ensayo basado en células para evaluar la absorción de la proteína Tau por la microglía

Comience con una placa de fondo plano de múltiples pocillos que contenga microglía murina adherida: células fagocíticas en el cerebro.

Introducir un medio sin suero que contenga inmunocomplejos. Estos complejos consisten en anticuerpos unidos a agregados de proteína Tau fosforilados, que se forman durante ciertas enfermedades neurodegenerativas.

Los agregados Tau están etiquetados con un tinte fluorescente verde sensible al pH.

Durante la incubación, estos inmunocomplejos interactúan con los receptores Fc de las células microgliales, facilitando su engullimiento.

Este endosoma que contiene inmunocomplejos se fusiona con un lisosoma, formando un endolisosoma. El ambiente ácido del endolisosoma hace que las moléculas de colorante sean fluorescentes.

Lavar para eliminar los inmunocomplejos no internalizados.

Tratar con solución de tripsina-EDTA para desprender las células.

Transfiera la suspensión celular a una placa inferior en U colocada sobre hielo para estabilizar el endolisosoma. Granular las células y desechar el sobrenadante.

Lave y vuelva a suspender las celdas con tampón FACS.

Usando FACS, identifique las células vivas individuales y cuantifique la intensidad de fluorescencia