Aislamiento de linfocitos T asesinos naturales invariantes de un modelo de ratón

Comience inyectando por vía intraperitoneal un glicolípido sintético en un ratón.

Las

células presentadoras de antígenos, o APC, internalizan el glicolípido y lo presentan a través de la molécula MHC no clásica CD1d.

Las APC migran al bazo e interactúan con las células T asesinas naturales invariantes o las células iNKT, induciendo la activación y proliferación de células iNKT.

Cosecha el bazo. Disociarlo mecánicamente para generar una suspensión unicelular.

Transfiera las células a un tubo. Agregue un medio de gradiente de densidad y centrifugue para separar los linfocitos.

Recoge los linfocitos. Agregue tetrámeros CD1d marcados con fluoróforo cargados con antígenos glicolípidos que interactúan con las células iNKT.

Retire los tetrámeros no unidos. Superposición con microperlas magnéticas que se unen a los fluoróforos unidos a tetrámeros.

Retire las perlas sueltas y cargue la suspensión celular en una columna magnética.

Bajo el campo magnético, las celdas iNKT unidas a perlas se retienen en la columna mientras que las celdas restantes fluyen.

Retire la columna del campo magnético. Agregue un tampón de elución para eluir las células iNKT.

Inyectar DBA/1 normal de ratón por vía intr