Una técnica ex vivo para fabricar linfocitos T receptores de antígenos quiméricos

Tome células T primarias, mezcladas con perlas magnéticas conjugadas con anticuerpos en un medio suplementado con interleucina-2, e incube.

Los anticuerpos se unen a CD3 en el complejo receptor de células T y el receptor coestimulador CD28, mientras que la interleucina-2 se une a su receptor afín, causando la activación y proliferación de células T.

Introducir vectores lentivirales con un ARN transgénico que codifica un receptor de antígeno quimérico o CAR, e incubar.

Tras la fusión vector-membrana celular, el ARN viral se somete a una transcripción inversa en ADN, integrándose en el genoma del huésped.

Las células T transducidas expresan CAR unidas a la superficie.

Recolecte las células a intervalos definidos.

Para la criopreservación, tome una alícuota de células, separe las perlas unidas mediante pipeteo y sepárelas magnéticamente.

Gire las células y vuelva a suspenderlas en un medio de criopreservación.

Congele las células y guárdelas a una temperatura criogénica.

Para evaluar la expresión de CAR, tome otra alícuota de células, gire hacia abajo las células y vuelva a suspenderlas en un tampón.

Introduzca un anticuerpo marcado con fluorescencia específico para CAR y detecte la e