Mejora de la transducción viral en células asesinas naturales utilizando un polímero catiónico
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:21 min. • July 8th, 2025
Tomemos como ejemplo las células asesinas naturales o NK. Agregue vectores de lentivirus que comprenden enzimas virales y moléculas de ARN diseñadas que codifican una proteína fluorescente.
Agregue polímeros catiónicos y sedimente las células y los virus.
Los polímeros neutralizan las cargas negativas tanto en el virus como en la célula, facilitando la fusión de la membrana.
El ARN se transcribe de forma inversa en ADN y se integra en el genoma del huésped, lo que permite la expresión de proteínas fluorescentes.
Agregue medios suplementados con la citocina interleucina-2 o IL-2.
La IL-2 desencadena la señalización intracelular que promueve la supervivencia y proliferación de las células NK al tiempo que preserva la expresión transgénica.
Transfiera la mezcla a un pozo recubierto con anticuerpos que se unen a inmunorreceptores específicos en las células NK, lo que hace que liberen citoquinas antivirales.
Cuantificar las citocinas liberadas para evaluar el impacto del polímero en la producción de citoquinas.
Agregue tintes fluorescentes para etiquetar el ADN de las células necróticas.
Mediante citometría de flujo, identifique células vivas y cuantifique la señal de la proteína fluore
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