Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:57 min. • July 8th, 2025
Comience con un tubo que contenga ARNm transcritos in vitro que codifiquen proteínas fluorescentes verdes.
El ARNm contiene nucleótidos modificados, 5-metil-citidina trifosfato y pseudouridina trifosfato, que previenen la respuesta inmune y mejoran la estabilidad del ARNm.
El extremo 5' del ARNm se desfosforila, lo que impide su reconocimiento por los receptores de reconocimiento de patrones en los macrófagos.
Agregue un reactivo de transfección a base de lípidos catiónicos al ARNm, facilitando la encapsulación del ARNm a través de interacciones electrostáticas y formando un complejo.
Introduzca los complejos lípidos-ARNm en una placa de múltiples pocillos con macrófagos primarios derivados de ratones adheridos y agite suavemente para una mezcla uniforme.
Los macrófagos internalizan el complejo que contiene ARNm en un endosoma. Más tarde, el complejo se fusiona con la membrana endosómica, liberando los ARNm en el citoplasma celular.
La cola de poli-A en el extremo 3' estabiliza el ARNm que se somete a la síntesis de proteínas para producir proteínas fluorescentes verdes.
Bajo un microscopio de fluorescencia, la fluorescencia verde dentro de los macrófagos sugiere la transfección ex
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