JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
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Tomemos un ratón inmunocomprometido que posee solo neutrófilos y monocitos como células inmunes funcionales.
Inyecte ciclofosfamida por vía intraperitoneal, un medicamento que se dirige a las células progenitoras inmunitarias.
El fármaco ingresa activamente a las células progenitoras inmunes que proliferan activamente y reticula los ácidos nucleicos, causando la muerte celular. La muerte de las células progenitoras conduce al agotamiento de las células inmunitarias.
Administre disulfiram, un fármaco que forma un aducto con ciclofosfamida, lo que reduce los efectos secundarios inducidos por la ciclofosfamida.
Inyecte por vía subcutánea una mezcla de células tumorales humanas y células mononucleares de sangre periférica, o PBMC, en una mezcla de proteínas gelatinosas adecuada.
La mezcla de proteínas forma un gel, imitando la matriz extracelular fisiológica, y atrapa las células tumorales.
El agotamiento funcional de las células inmunitarias permite que las células tumorales proliferen y formen nuevos vasos sanguíneos, transformándose en un xenoinjerto tumoral sólido.
Simultáneamente, las células T de las PBMC inyectadas se infiltran en el tumor.
El xenoinjerto tumoral exhibe crecimiento y células T infiltrantes de tumores, estableciendo un modelo de ratón de xenoinjerto humanizado.
Para el agotamiento de las células mieloides, administre por vía intraperitoneal 100 miligramos por kilogramo de ciclofosfamida y por vía oral administre 125 miligramos por kilogramo de disulfiram a ratones hembra NOD/SCID de 6 a 8 semanas de edad una vez al día durante dos días. 24 horas después de la segunda dosis de ciclofosfamida y disulfiram, vuelva a suspender 5 x 106 PBMC humanos recién aislados y 2,5 x 106 células de la línea celular tumoral humana en 200 microlitros de PBS más 50% de matrigel por animal, e inyectar todo el volumen por vía subcutánea en el flanco derecho de cada animal experimental. Mida y registre el volumen del tumor primario 2 veces por semana durante 4 a 6 semanas.