Inhibición de la autofagia basada en siRNA en células dendríticas inmaduras infectadas por el virus del herpes simple
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:44 min. • July 8th, 2025
Tome dos cubetas de electroporación. Una cubeta contiene un pequeño ARN interferente, o ARNip, diseñado para inhibir la producción de FIP200, una proteína inductora de autofagia.
La segunda cubeta contiene un siRNA codificado como control que no inhibe la producción de FIP200.
Agregue células dendríticas inmaduras, o iDC; electroporar para la entrada celular de ARNip y luego colocar placas en las células.
El siRNA internalizado se une a un complejo de silenciamiento inductor de ARN.
El complejo con el ARNip específico de FIP200 escinde su ARNm objetivo, inhibiendo la producción de FIP200, mientras que los iDC tratados con ARNip de control producen FIP200.
Recolecte las células y agregue el virus del herpes simple. Tras la fusión de la envoltura viral y la membrana celular, el ADN liberado ingresa al núcleo y conduce a la producción de proteínas virales y nucleocápsides.
Las proteínas virales alteran las láminas nucleares. FIP200 forma un complejo que desencadena una cascada de señalización, induciendo la autofagia de las láminas alteradas para su degradación y facilitando el escape de las nucleocápsidas virales al citoplasma.
La inhibición mediada por ARNip de la producción de FIP2
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