Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:50 min. • July 8th, 2025
Tome células T con receptores que se unen a los antígenos del virus de la hepatitis B o VHB.
Inyecte las células T en la vena de la cola de un ratón.
Permita que las células inyectadas se propaguen en el hígado.
Para imitar la infección por virus, tome plásmidos que transportan el genoma del VHB.
Inyecte los plásmidos rápidamente en la vena de la cola, dirigiendo los plásmidos hacia el hígado.
La fuerza del líquido permeabiliza el endotelio del vaso y genera poros temporales en las células.
Los plásmidos ingresan a la célula y se someten a la síntesis de ARN, produciendo ARNm que se utiliza para la producción de proteínas virales.
Algunas de estas proteínas actúan como antígenos virales.
Las moléculas presentadoras de antígenos transportan los antígenos virales a la superficie celular, exponiéndolos a las células T.
Estas células inmunitarias interactúan con los antígenos virales e inician mecanismos para eliminar las células infectadas, inhibiendo el ensamblaje y la propagación de proteínas virales.
Para la administración hidrodinámica del plásmido del VPH a través de la vena de la cola, diluya 10 microgramos de plásmido del VPH en un equivalente al 8% de la masa corporal de PBS. Cargue el plásmido en una jeringa de 3 mililitros equipada con una aguja de media pulgada de calibre 26 por ratón.
Caliente ratones HHD bajo una lámpara de calor durante cinco minutos para dilatar las venas de la cola y tire con cuidado de un ratón hacia un inmovilizador de plástico. Ubique una vena lateral dilatada de la cola en el tercio medio de la cola e inserte la aguja paralela a la vena para administrar todo el volumen de plásmido a través de la vena de la cola durante un período de tres a cinco segundos.
Para la transferencia de células T CD8 positivas derivadas de iPSC específicas de antígeno viral, recolecte las células T CD8 positivas para iPSC en el día 22 del cultivo como se demuestra y siembre las células en una nueva placa de cultivo celular de 10 centímetros.
Después de 30 minutos en la incubadora de cultivo celular, filtre las células flotantes a través de un colador de nailon de 70 micrómetros y cuente las células viables. Diluido se vende a 1.5 x 107 celdas por mililitro de concentración de PBS.
Inyecte 200 microlitros de células en ratones HHD individuales de cuatro a seis semanas de edad en la vena de la cola, como se acaba de demostrar. El día 14 después de la transferencia celular, realice una administración hidrodinámica de plásmidos de VPH como se demuestra.