JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
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Tomemos como ejemplo las células T reguladoras derivadas de iPSC, o Tregs, que expresan receptores específicos de ovoalbúmina. Inyéctalos en la vena de la cola de un ratón restringido.
Las células llegan a la membrana sinovial que recubre la superficie interna de la cápsula de la articulación de la rodilla.
A continuación, administrar albúmina de suero bovino metilado o mBSA, emulsionada con un adyuvante.
Los adyuvantes mejoran la presentación de mBSA a las células presentadoras de antígenos, o APC, que procesan y presentan los fragmentos a través de moléculas MHC.
Las APC migran a los ganglios linfáticos, induciendo la activación de las células T. Las células T activadas migran a la articulación de la rodilla.
Inyecte mBSA solo y mBSA con ovoalbúmina en las articulaciones de la rodilla izquierda y derecha, respectivamente.
En la rodilla izquierda, las APC presentan los fragmentos de mBSA a las células T activadas, lo que desencadena la liberación de citoquinas proinflamatorias y provoca daño tisular e hinchazón de las articulaciones, lo que se denomina artritis.
En la rodilla derecha, las Tregs interactúan con las APC presentadoras de ovoalbúmina y liberan citoquinas antiinflamatorias, reduciendo el daño tisular y la hinchazón de las articulaciones, mejorando así la artritis.
Comience separando los cultivos celulares de interés con tripsina y resuspendiendo cada tipo de célula en 10 mililitros de medio fresco. Coloque cada cultivo celular en un nuevo plato de 10 centímetros y deje que las células alimentadoras se adhieran a la incubadora de cultivos celulares. Después de 30 minutos, recoja las iPSC flotantes y pase los cultivos a través de filtros celulares individuales de 70 micras para eliminar los grupos de células para su recuento.
Vuelva a suspender cada cultivo a una concentración de 1,5 x 107 células por mililitro en PBS frío, filtrando nuevamente según sea necesario. Luego, coloque ratones C57BL6 hembra de 4 a 6 semanas de edad uno a la vez en un inmovilizador de animales pequeños y transfiera adoptivamente 200 microlitros de un tipo de célula por ratón a la vena de la cola de cada animal.
Use un calibrador de reloj para medir la hinchazón de ambas rodillas para establecer la medición de referencia. 10 días después de la transferencia celular, use una jeringa de 1 mililitro para inyectar a los ratones 100 microgramos de BSA metilado emulsionado en un adyuvante de Freund completo en la base de la cola de cada animal experimental.
17 días después de la transferencia celular, inducir artritis mediante la inyección intraarticular de 20 microgramos de BSA metilado en 10 microlitros de PBS en la articulación de la rodilla izquierda y 20 microgramos de BSA metilado, y 100 microgramos de ovoalbúmina entera en 10 microlitros de PBS en la articulación de la rodilla derecha de cada animal anestesiado transferido adoptivamente.
Siete días después de inducir la artritis, mida las rodillas nuevamente para calcular el aumento porcentual en el diámetro de la rodilla y extirpe quirúrgicamente las rótulas. Fije las juntas en formalina. Luego, después de la descalcificación en EDTA, incruste las rodillas en parafina y obtenga secciones de 4 micras para tinción y análisis histoquímico.