Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:41 min. • July 8th, 2025
Tomemos poliplex de transfección que contienen plásmidos diana unidos a un polímero. Los plásmidos codifican un antígeno viral fusionado con una etiqueta peptídica y una etiqueta de afinidad.
Incubar los poliplex con células de mamíferos, que internalizan los poliplexos dentro de los endosomas.
El polímero induce la ruptura de la vesícula. Los plásmidos liberados expresan el antígeno viral, que se secreta extracelularmente.
Coseche el sobrenadante que contiene el antígeno y los contaminantes. Agregue un agente competidor a baja concentración.
Cárguelo en una columna de cromatografía de afinidad.
Las etiquetas de afinidad se unen a la resina de la columna, inmovilizando el antígeno, mientras que el agente competidor disminuye la unión no específica.
Fluya el agente competidor a baja concentración, eliminando los contaminantes débilmente unidos.
Lavar con concentraciones crecientes de agentes competidores para desplazar los antígenos fuertemente unidos, eluyéndolos.
Introducir vesículas bacterianas de la membrana externa, u OMV, con una proteína de captura unida a la superficie e incubar.
Las etiquetas peptídicas de antígeno se unen a las proteínas de captura, formando una vacuna OMV
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