Un modelo de interposición aórtica de ratón para estudiar el rechazo vascular inducido por el sistema inmunitario

Prepare un ratón donante anestesiado y colóquelo en posición supina. Haga una incisión en la línea media para exponer la cavidad abdominal.

Exteriorizar el intestino para ubicar la aorta abdominal infrarrenal o IAA debajo de las arterias renales, transportando sangre oxigenada.

Separe el AAI de la vena cava inferior adyacente, que transporta sangre desoxigenada.

Ligue las ramas pequeñas cerca del IAA y sujete el IAA para obstruir el flujo sanguíneo.

Reseque un segmento de longitud adecuada y colóquelo en solución salina.

Repita el procedimiento con un ratón receptor de un origen genético diferente.

Implante el IAA del donante dentro del receptor, haciendo coincidir su orientación anatómica.

Realice anastomosis de extremo a extremo suturando los extremos del injerto del donante a los extremos receptores.

Suelte las pinzas y verifique que el flujo sanguíneo sea normal sin fugas. Regrese el intestino a la cavidad abdominal. A continuación, sutura el sitio de la incisión.

El modelo ahora está listo para estudiar las respuestas inmunes contra el injerto IAA trasplantado.

Comience colocando el ratón donante en posición supina sobre una tabla de plexiglás limpia y delgada envuelta en un paño estéril debajo del microscopio quirúrgico con un aumento de 8-30X.

Después de confirmar la anestesia quirúrgica adecuada mediante pellizco en el dedo del pie, use tijeras estériles para hacer una sola incisión en la línea media desde el pubis hasta el proceso xifoides. A continuación, use un pequeño retractor para abrir las paredes abdominales, exponiendo la cavidad abdominal. Luego, use aplicadores estériles con punta de algodón para retraer suavemente los intestinos hacia la izquierda del animal. Cubra el tejido con una gasa humedecida con solución salina y mueva los órganos reproductivos hacia abajo para ubicar la aorta infrarrenal y la vena cava inferior o IVC.

Ahora, use fórceps médicos número 5 para separar la aorta de la VCI en la arteria renal izquierda cerca de la bifurcación. Luego, use suturas de monofilamento de poliamida 10-0 para ligar las ramas pequeñas cerca de la aorta. Cuando la aorta donante y la VCI se hayan separado, sature el vaso con solución salina. Cubra la cavidad expuesta con una gasa humedecida y deje al donante a un lado en un área estéril.

Ahora, coloque el ratón receptor bajo el microscopio y separe la aorta receptora de la VCI como se acaba de demostrar. Luego, coloque dos pinzas microvasculares de 4 milímetros proximales y distales al segmento de interés aproximadamente a 5 milímetros de distancia. A continuación, con las microtijeras de Vannas-Tübingen, realice una sola aortotomía horizontal y reseque no más de 0,5 milímetros de la aorta abdominal para acomodar el injerto aórtico del donante.

Regrese al donante al microscopio y corte un segmento de injerto de 3 a 4 milímetros como se acaba de demostrar. Entonces. Use una aguja de calibre 25 5/8 para enjuagar la aorta extirpada con solución salina heparinizada, teniendo cuidado de que la punta de la aguja no entre en contacto con el recipiente, y coloque el recipiente en un recipiente de solución salina heparinizada sobre hielo.

Dentro de los 30 minutos posteriores a la escisión, coloque el injerto aórtico del donante en la posición ortotópica del receptor, haciendo coincidir la orientación anatómica del injerto respectivo con la del receptor. Luego, agarre suavemente la túnica externa del vaso y use las pinzas del número 5 para invertirla ligeramente. Ahora, use las pinzas para introducir una aguja unida a una sutura de monofilamento de poliamida 10-0 a través de todo el espesor de la pared del vaso para asegurar el injerto aórtico del donante al vaso resecado del receptor.

Para la colocación de puntos continuos, coloque las suturas de permanencia a las 9 en punto tanto en el extremo superior como en el inferior del injerto. Luego, comenzando en el extremo superior del injerto a partir de las 3 en punto, anastomosar los extremos resecados con dos suturas continuas y asegurar la sutura a la sutura de estancia. Luego, voltee el injerto y continúe la sutura continua hacia la parte dorsal del vaso, encontrándose con la sutura de permanencia de origen. Asegure la sutura sin aplicar mucha presión sobre el vaso y repita la sutura para la anastomosis inferior.

Una vez completada la anastomosis, suelte la pinza microvascular distal para permitir el flujo sanguíneo retrógrado a través del vaso. Si no se observa sangrado, suelte la pinza proximal. Si no se observan obstrucciones de sangre, use un par de fórceps para agarrar suavemente un extremo de las suturas de la estadía y desvíe ligeramente el vaso para inspeccionar la pared posterior del vaso. No se debe observar ningún arrugado. Si se observa un patrón de pulso vigoroso tanto en los vasos donantes como en los receptores, use aplicadores con punta de algodón para devolver los intestinos a la cavidad abdominal.

Finalmente, use un portaagujas y pinzas Graefe para cerrar la pared abdominal con suturas de polipropileno 5-0 y costuras continuas. Usando un cierre subcuticular, cierre la capa de piel con las mismas suturas. Se puede observar la función motora de las extremidades traseras para evaluar el éxito de la cirugía.