Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:58 min. • July 8th, 2025
Comience con plásmidos bidireccionales que transportan ADNc que codifican ciertas proteínas esenciales virales de una cepa de influenza adaptada al frío.
Introducir un nuevo conjunto de plásmidos bidireccionales que contienen hemaglutinina y ADNc de neuraminidasa modificada de una cepa de influenza diferente.
Introduzca un reactivo de transfección a esta mezcla e incube para formar un complejo con los plásmidos.
Transfiera estos complejos a células similares a epiteliales humanas cultivadas para permitir la entrada de plásmidos en la célula.
Los plásmidos bidireccionales con dos promotores en orientaciones opuestas permiten la producción de proteínas virales y su correspondiente ARN.
Incube las células a una temperatura más baja.
Las proteínas virales y los ARN virales se autoensamblan para formar virus de influenza recombinantes adaptados al frío con replicación reducida en condiciones más cálidas.
Superposición con células MDCK que sobreexpresan ácido siálico y enzimas tripsina modificadas que permiten la unión viral y la entrada dentro de las células.
Incubar a la misma temperatura para inducir la replicación y producción de nuevos virus.
Centrifugar y cosechar los virus vivos a
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