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Inmunología
0 vistas • 3:33 min • July 8th, 2025
Comience con un ratón restringido que carezca de interleucina-10, una citoquina antiinflamatoria, que resulta en inflamación del colon.
Tome una jeringa llena de una suspensión fecal rica en diversos microbios intestinales, de un ratón sano.
Luego, conecte un tubo oral a la jeringa.
Inserte este tubo en la boca, guiándolo hacia abajo hasta el estómago del ratón.
Ahora, administre la suspensión fecal directamente en el estómago, permitiendo que llegue gradualmente al colon.
Una vez en el colon, los microbios fecales se multiplican y colonizan, restableciendo los microbios intestinales.
Los microbios colonizados luego liberan varios metabolitos secundarios.
Estos metabolitos ayudan en la producción de mucina, que repara el epitelio del colon y restaura la integridad intestinal.
Dentro del epitelio del colon, los microbios fecales y sus metabolitos interactúan con las células inmunitarias.
Esta interacción hace que las células inmunitarias liberen citoquinas antiinflamatorias, lo que lleva a una reducción de la inflamación del colon en el ratón deficiente en interleucina-10.
Prepare una solución estéril agregando una solución de glicerol al 10% a la solución salina normal. Agregue 10 mililitros de esta solución al tubo cónico por cada gramo de gránulos fecales. Homogeneizar esta mezcla a baja velocidad tres veces durante 30 segundos, utilizando un homogeneizador de sobremesa dentro de una campana extractora para volver a suspender las heces. Filtre la suspensión fecal a través de dos capas de gasa de algodón estéril. Guarde el filtrado temporalmente en un refrigerador hasta por seis horas, o empaquételo en viales criogénicos estériles y guárdelo en un congelador a menos 80 grados.
Limpie a fondo el homogeneizador o la licuadora siguiendo un procedimiento estándar. Descongele la suspensión fecal congelada en hielo si usa muestras congeladas. Mezcle la suspensión fecal descongelada en vórtice. Transfiera la suspensión fecal fresca o descongelada a jeringas de 1 mililitro. Pese los ratones y elija el tamaño correcto de la aguja de sonda y el volumen máximo de dosis.
Pruebe la aguja de sonda midiendo la longitud desde la punta de la nariz del ratón hasta la parte inferior del esternón. Llene la jeringa con glicerol al 10% en solución salina o suspensión fecal, y elimine las burbujas de aire dentro de la jeringa y la aguja. Coloque una jaula para ratones en el gabinete de bioseguridad, retire la cubierta de plástico de la jaula y deje el estante de metal en su lugar.
Abra la rejilla metálica con una mano. Agarra un ratón por la cola y colócalo en el estante de metal. Sostenga el ratón por la cola con una mano y use los dedos pulgar y medio de la otra mano para sujetar al animal agarrando la piel sobre los hombros. Extienda suavemente la cabeza del animal hacia atrás y sostenga la cabeza en su lugar con una mano. Coloque la aguja de sonda en la parte superior de la lengua dentro de la boca.
Avance suavemente a lo largo del paladar superior hasta que la aguja llegue al esófago. Pase la aguja suavemente con un solo movimiento. Una vez que la aguja esté colocada y verificada correctamente, administre lentamente el material empujando la jeringa unida a la aguja. Después de la dosis, saque suavemente la aguja. Marque el ratón y devuélvalo a su jaula de origen. Monitoree al animal durante 5 a 10 minutos buscando signos de dificultad para respirar o angustia. Monitorizar de nuevo a los ratones entre 12 y 24 horas después del trasplante de microbiota fecal.