Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:55 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples que contenga células asesinas naturales o NK y células cancerosas. Los pozos de control contienen solo células cancerosas.
Centrífuga para facilitar el contacto celular.
incubar. Los receptores activadores en las células NK se unen a los ligandos de la superficie de las células cancerosas, lo que hace que las células NK liberen gránulos que contienen moléculas citotóxicas.
Estas moléculas crean poros de la membrana de las células cancerosas e inducen la apoptosis liberando contenidos intracelulares, incluida la lactato deshidrogenasa o LDH.
Agregue un detergente para lisar las células cancerosas en los pocillos de control para obtener la máxima liberación de LDH.
Centrifugar y transferir una porción de sobrenadantes que contienen LDH a una placa de ensayo.
Agregue el reactivo de ensayo e incube.
La LDH convierte el lactato en piruvato reduciendo el NAD+. La diaforasa utiliza NADH para reducir la sal de tetrazolio, formando un producto formazán de color rojo.
Agregue una solución ácida para detener la reacción enzimática.
Utilice un lector de microplacas para medir la absorbancia de formazán en los pocillos.
La intensidad del formazán es proporci
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