Una técnica para generar una nueva plataforma de administración para una liberación retardada de moléculas

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Inmunología

0 vistas • 3:50 min • July 8th, 2025

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Conecte una jeringa con un tubo dispensador a una bomba. La jeringa contiene una mezcla de fotoiniciador y poliéster, una mezcla de polímeros única.

Dispense la mezcla en una solución acuosa viscosa de un polímero a base de celulosa. Esto induce la separación de fases, formando una estructura esférica polimérica llamada poliburbuja.

La irradiación ultravioleta activa el fotoiniciador, lo que hace que el polímero se reticule y forme una capa que rodea el núcleo interno.

A continuación, inserte una aguja para inyectar una solución viscosa de moléculas marcadas con fluoróforo en el núcleo de poliburbujas.

Irradiar nuevamente para restaurar la integridad de las burbujas de polietileno. Liofilizar para eliminar el exceso de agua y recuperar la burbuja de polietileno.

Para comprobar el perfil de liberación, incube la burbuja de polietileno en un tampón.

Al entrar en contacto con una fase acuosa, la cubierta de polímero sufre erosión, formando poros. Con el tiempo, estos poros se interconectan, liberando las moléculas marcadas.

Recolecte regularmente el sobrenadante y cuantifique las intensidades de fluorescencia.

Un aumento repentino de la fluorescencia después de una incubación prolongada confirma la liberación retardada de la ráfaga.

Para fabricar las burbujas de polietileno, primero use una pipeta de transferencia de 1 mililitro para agregar 800 microlitros de CMC al 10% en un vial de vidrio de 0,92 mililitros. Para sintetizar PCLTA, mezcle 1.000 gramos por mililitro de 14 kilodalton PCL en 200 microlitros de DCM. Para sintetizar PLGADA, mezcle 1.000 gramos por mililitro de 5 kilodalton PLGADA en 200 microlitros de cloroformo.

Mezcle el fotoiniciador con la mezcla de polímeros de interés en una proporción de 0,005 a 1 y cargue 200 microlitros de la solución resultante en una jeringa de vidrio de 1 mililitro montada en una bomba de jeringa conectada a un tubo dispensador de acero inoxidable con un diámetro interior de 0,016 pulgadas.

Usando un micromotor para controlar el movimiento hacia adelante y hacia atrás del tubo de polímero, inyecte el polímero en el CMC al 10% en el vial de vidrio para formar las poliburbujas y curar las poliburbujas bajo luz ultravioleta a una longitud de onda de 254 nanómetros durante 60 segundos a 2 vatios por centímetro cuadrado. Luego, congele rápidamente las poliburbujas en nitrógeno líquido durante 30 segundos y liofilice los portadores durante la noche a 0,01 milibares de vacío y menos 85 grados Celsius.

Para centrar la carga de interés dentro de una burbuja de polietileno, mezcle la carga con CMC al 5% y un rotador durante la noche para aumentar la viscosidad de la carga antes de inyectar manualmente 2 microlitros de la mezcla de carga en la burbuja de polietileno. Cuando se haya inyectado toda la carga, recure, congele rápidamente y liofilice la poliburbuja inyectada como se acaba de demostrar.

A la mañana siguiente, use fórceps para separar la burbuja de polietileno de la CMC seca y lave la burbuja de polietileno con agua desionizada para eliminar cualquier CMC residual. Luego, corte la burbuja de polietileno por la mitad y obtenga imágenes de las mitades mediante microscopía confocal para asegurarse de que la carga esté centrada.

Para la liberación de carga de moléculas pequeñas, incube las poliburbujas con acriflavina centrada y 400 microlitros de PBS a 37 grados Celsius para la duración de incubación adecuada. En cada momento experimental, recoja el sobrenadante y agregue 400 microlitros de PBS fresco al vial. Luego, use un lector de placas para cuantificar la intensidad de fluorescencia del sobrenadante recolectado.

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Última actualización: 22 agosto 2026