Una inyección de plasma rico en plaquetas en el tendón de Aquiles seccionado de una rata

Coloque una rata receptora anestesiada con una extremidad trasera afeitada en una almohadilla tibia bajo un microscopio de disección.

Haga una incisión en la piel y diseccione la fascia, exponiendo el complejo del tendón de Aquiles.

Extirpe el tendón plantar y extirpe un pequeño segmento del tendón de Aquiles, creando una lesión.

Sutura la incisión y deja que la rata se recupere.

Recolectar sangre completa de una rata donante genéticamente diferente, mezclada con un anticoagulante.

Centrifugar para obtener una fase inferior de glóbulos rojos y una fase superior de plasma rico en plaquetas, o PRP.

Transfiera el PRP a un tubo y gire las plaquetas. Eliminar parcialmente el sobrenadante y volver a suspender las plaquetas para obtener PRP concentrado.

Agregue cloruro de calcio e incube para inducir la activación plaquetaria. Luego, inyecte las plaquetas activadas en el sitio suturado del receptor.

Las plaquetas activadas liberan citocinas específicas y factores de crecimiento que inducen la reparación del tendón en el sitio de la lesión.

Comience pesando y etiquetando a la rata. Después de confirmar el nivel adecuado de sedación mediante pellizco en los dedos de los pies, aplique gotas de agua sobre las córneas del animal y retire el pelo de la extremidad trasera izquierda. Desinfecte la piel expuesta con una dilución de 1 a 10 de solución de iso-betadina y coloque al animal en una almohadilla térmica a 20 grados Celsius, bajo un microscopio de disección.

En la posición de débito lateral con la extremidad trasera izquierda en la posición superior, agarre la pata de la extremidad trasera izquierda con fórceps y haga una incisión lateral de piel de 20 a 25 milímetros alrededor del tendón de Aquiles, con unas tijeras finas. Diseccione la fascia para exponer el complejo del tendón de Aquiles y elimine el tendón plantar.

Cortar el tendón de Aquiles transversalmente 5 milímetros proximales a su inserción calcánea y extraer una porción de 5 milímetros de largo. Luego, use hilo reabsorbible en suturas continuas para cerrar la fascia y la piel, y coloque a la rata bajo una fuente de calor con monitoreo hasta que se recupere por completo. Mientras los animales receptores se recuperan, recolecte 20 mililitros de sangre completa de un corazón de rata donante, por animal de experimentación, en tubos individuales que contienen citrato de sodio tamponado al 3,2%.

Para obtener el plasma rico en plaquetas, centrifugar la sangre y utilizar una pipeta de transferencia de plástico para cosechar cuidadosamente la fase superior que contiene PRP en un segundo tubo de plástico. Determine el volumen de PRP recolectado y mida el recuento de plaquetas en un analizador de hematología.

Centrifuga el PRP nuevamente y transfiere con cuidado el sobrenadante a un nuevo tubo de plástico. El volumen restante en el tubo de PRP debe ser de alrededor de 2/3 del volumen requerido para lograr 2,5 x 10⁶ plaquetas por microlitro. A continuación, vuelva a suspender suavemente el gránulo de plaquetas con pipeteo. Mida el recuento de plaquetas de este plasma rico en plaquetas concentrado, agregando nuevamente el volumen apropiado de plasma pobre en plaquetas autólogo para alcanzar la concentración objetivo según sea necesario.

Activar las plaquetas con 50 microlitros de cloruro de calcio por mililitro de PRP durante aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente. Luego cargue las plaquetas en una jeringa de 1 mililitro equipada con una aguja de calibre 21 e inyecte 50 microlitros de plaquetas directamente en el sitio de sutura de cada animal.