Generación de vesículas de membrana plasmática a partir de células madre de médula ósea

Comience con un cultivo de células madre de médula ósea.

Introducir el tampón tripsina-EDTA para separar las células y romper los grumos celulares, formando una suspensión unicelular.

Centrifugar, luego retirar el sobrenadante. Vuelva a suspender el gránulo con un medio fresco.

Transfiera la suspensión a una jeringa y conéctela a una unidad de filtro de membrana.

Empuje el émbolo y deseche el medio que contiene filtrado.

Desconecte el filtro. Llene la jeringa con un medio nuevo. Vuelva a conectar el filtro y empuje rápidamente el émbolo.

La presión del líquido obliga a la célula hacia los poros del filtro.

Esto produce una vesícula de membrana plasmática esférica o PMV.

Estas vesículas contienen componentes celulares y orgánulos rodeados por la membrana.

Examine el filtrado bajo un microscopio de contraste de fase invertido para observar vesículas esféricas translúcidas.

Las dimensiones de las vesículas coinciden con el tamaño de poro de la membrana del filtro, lo que confirma la generación de PMV.

Para generar los PMV, primero, cultive PMSC de ratón en medio de cultivo DMEM completo en un pocillo de una placa de seis pocillos en una incubadora humidificada a 37 grados Celsius y 5%