Generación de neutrófilos antiangiogénicos asociados a tumores

Tomemos un tumor de melanoma murino que comprende neutrófilos asociados al tumor o TAN.

Los TAN muestran una actividad elevada de la enzima nicotinamida fosforribosiltransferasa, o NAMPT, estimulando la angiogénesis, la proliferación de vasos sanguíneos en los tumores y facilitando el crecimiento tumoral.

Pica el tejido y agrega enzimas para degradar la matriz del tejido, aflojando las células.

Filtrar la suspensión a través de un colador y centrifugar para granular las células.

Agregue un tampón de lisis para lisar los glóbulos rojos, luego centrifugue y deseche el sobrenadante que contiene restos celulares.

Introducir anticuerpos para bloquear los receptores Fc celulares, evitando así la inmunotinción inespecífica.

Introduzca un cóctel de anticuerpos marcado con fluoróforo específico para marcadores de superficie en TAN y un tinte para discriminar las células muertas.

Usando FACS, aísle los TAN viables marcados con fluoróforo y transfiéralos a una microplaca.

Agregue un inhibidor que bloquee la actividad de NAMPT a los pocillos seleccionados e incube.

Utilice las células para evaluar su capacidad estimulante de la angiogénesis. Los TAN tratados con inhibidores muestran una angiog