JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
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Tome un portaobjetos de cámara de pocillos múltiples que contenga monocapas de microglía.
En el pozo de prueba, cubra las células con β-glucano. El pozo de control carece de β-glucano. Incubar.
En el pozo de prueba, los β-glucanos, patrones moleculares asociados a patógenos, se unen a receptores específicos en la microglía, causando fagocitosis de β-glucano.
Esto activa la microglía, produciendo y liberando moléculas bioactivas como oxidantes reactivos y citoquinas en el medio.
Recoge los medios que contienen moléculas bioactivas de los pocillos y fíltralos para eliminar los residuos y el β-glucano.
Congelar el medio a bajas temperaturas para preservar la actividad biológica de las moléculas bioactivas.
A continuación, descongele y agregue el medio a un portaobjetos de cámara de múltiples pocillos que contiene monocapas de células cancerosas cerebrales. Incubar.
Las moléculas bioactivas desencadenan vías de señalización celular, reduciendo la proliferación de células cancerosas e induciendo la apoptosis.
La reducción de la proliferación de células cancerosas y el aumento de la apoptosis sugieren que los β-glucanos son agentes que promueven las propiedades antitumorales de la microglía contra las células cancerosas cerebrales.
Active la microglía recubriendo las células microgliales BV-2 durante 72 horas con una concentración de 0,2 miligramos por mililitro de cuatro betaglucanos diferentes aislados de P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum y H. erinaceus. Después de 72 horas, recoja el sobrenadante con una pipeta y pase el volumen restante a través de un filtro de jeringa de 0,20 micrómetros. Luego, congele el sobrenadante a -80 grados centígrados durante al menos 24 horas. Para tratar GL261 con el medio preactivado acondicionado por microglía, agregue 250 microlitros de medio microglial tratado con betaglucano al 80% de células GL261 confluentes durante 72 horas.