Generación de células T CD8 positivas individuales a partir de células madre pluripotentes inducidas

Células madre pluripotentes inducidas por cultivo en una capa alimentadora de células estromales en una matriz de gelatina.

La capa alimentadora imita el entorno extracelular natural, guiando la diferenciación de células madre en organoides en forma de cúpula que contienen células progenitoras hematopoyéticas.

Agregue enzimas para disociar las células cocultivadas.

Transfiera las células a un plato nuevo recubierto de gelatina para la adhesión de las células del estroma.

Recoger las células progenitoras hematopoyéticas no adheridas en un medio de diferenciación.

Cultivarlos en una nueva capa alimentadora para promover la diferenciación de las células progenitoras en células T dobles positivas con receptores CD4 y CD8 y células T dobles negativas que carecen de ambos receptores.

Transfiera las células a un tubo. Incubarlos con perlas magnéticas que transportan anticuerpos específicos de CD4 que etiquetan selectivamente las células T dobles positivas.

Utilice un separador magnético para aislar las células dobles positivas y cultivarlas en una capa de alimentación fresca.

Complementar con una mezcla de citoquinas y anticuerpos para estimular las células, induciendo la regulación a la