Una técnica para cultivar neuronas del hipocampo de ratón

Tome un hipocampo de cachorro de ratón cosechado en un amortiguador.

Corta el hipocampo en fragmentos más pequeños y transfiérelos a un tubo cónico.

Lave el pañuelo con tampón. Una vez que los fragmentos se asienten, retire el búfer. Ahora, agregue tampón fresco y tripsina.

Durante la incubación, la tripsina, una enzima proteolítica, digiere la matriz extracelular del tejido, aflojando las neuronas del hipocampo.

Lave el tejido digerido con tampón.

Una vez que los fragmentos se asienten, retire el búfer. Agregue tampón nuevo y pipetee el tejido repetidamente para disociarlo mecánicamente, obteniendo una suspensión unicelular.

Una vez que el tejido no digerido se asiente, transfiera la suspensión celular a cubreobjetos recubiertos de poli-L-lisina con soportes de cera dentro de una placa de cultivo que contenga medios.

Las células se adhieren a las superficies recubiertas de poli-L-lisina a través de interacciones electrostáticas.

Ahora, coloque los cubreobjetos adheridos a las neuronas boca abajo en un plato que contenga células gliales corticales o no neuronales en un medio libre de suero.

En cultivo, los soportes de cera evitan el contacto directo entre las neuronas y las células