Generación de un cultivo de neuronas primarias de baja densidad a partir de neuronas embrionarias congeladas

Comience con un criovial que contenga neuronas embrionarias criopreservadas y colóquelo en un bloque calefactor para una descongelación controlada.

A continuación, transfiera las neuronas descongeladas a un tubo y dilúyalas con un medio neurobasal gota a gota para equilibrar la presión osmótica y prevenir la lisis celular.

Esto genera una suspensión homogénea con neuronas uniformemente dispersas.

Siembre la suspensión neural diluida en una placa de pocillos múltiples recubierta de poli-L-lisina que contenga un medio neurobasal enriquecido con nutrientes y antibióticos.

Incubar para permitir que la poli-L-lisina cargada positivamente interactúe con las neuronas a través de interacciones electrostáticas, facilitando su adherencia.

Suministre a los pocillos medios neurobasales frescos.

Incube las células en el mismo medio en condiciones húmedas para evitar la evaporación del medio.

Las neuronas embrionarias utilizan los nutrientes y crecen desarrollando procesos neuronales y formando neuronas primarias.

El medio neurobasal mantiene las neuronas primarias que aparecen muy espaciadas, generando un cultivo primario de baja densidad con conexiones neuronales.

Comience recubriendo una micr